原代細胞是剛從體內(nèi)取出的組織中獲得的細胞，要求不嚴格的話，十代以內(nèi)都算原代細胞。因為離體不久，所以其對外界的刺激的反應更接近體內(nèi)的實際情況，這也是為什么藥篩要用原代細胞，或者起碼要有原代細胞的驗證。
凍存的原代細胞該如何開始培養(yǎng)？
(1) 將一管細胞從液氮罐中取出，注意保護手和眼睛。
(2) 將凍存管快速的放入37℃水浴中，輕輕握住并旋轉(zhuǎn)，直到管內(nèi)物體*融化。
(3) 將凍存管立即從水浴中拿出，擦干，轉(zhuǎn)入無菌環(huán)境。
(4) 用70％的酒精沖洗凍存管，然后擦去多余酒精。
(5) 打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋（注意，由于凍存管有負壓，開蓋時可能會有少量溢出，這是正?，F(xiàn)象）。
(6) 用多聚賴氨酸包被培養(yǎng)瓶。多數(shù)細胞推薦的接種密度為每平方厘米5000個細胞。
(7) 蓋好培養(yǎng)瓶的蓋子，輕輕搖晃培養(yǎng)瓶以使細胞分布均勻。若需要氣體交換可打開蓋子。
(8) 將培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱中。
(9) 放入培養(yǎng)箱后第6-16小時更換一次培養(yǎng)基，以去除殘留的二甲基亞楓和未貼壁的細胞。
原代細胞的組織塊培養(yǎng)法：
1）組織塊接種后的前3天，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經(jīng)常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。
2）加入的培養(yǎng)液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。
3）當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產(chǎn)生的有毒物質(zhì)會影響原代細胞的生長。
4）為促進組織塊盡快粘貼在培養(yǎng)瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養(yǎng)瓶底壁上。
滬ICP備14030958號-14 管理登陸 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap