1.亮發(fā)光桿菌株篩選結果

經(jīng)過 7 個月的馴化培養(yǎng)，pH 3.0 和 pH 2.5 的酸性固體培養(yǎng)基上經(jīng)涂布有菌落生長，pH 2.0 的固體培養(yǎng)基上沒有觀察到菌落；乳酸濃度為 6%和 8% 固體培養(yǎng)基上有菌落生長，濃度為 10%乳酸的平板上沒有生長菌落；琥珀酸濃度為 4%、6%和 8% 的固體培養(yǎng)基上有菌落生長，琥珀酸濃度為 10% 的固體培養(yǎng)基上沒有菌落生長。經(jīng)顯微鏡觀察，初步確定出 6 株耐酸菌株。為了更確定地比較 6 株菌的耐酸性能，將這 6 株菌株分別涂布在 pH 3.0、6% 乳酸和 6%琥珀酸的酸性平板上。編號為 WJ-2 的菌株在這 3 種條件下的菌落數(shù)zui多，因此選其作為目的菌株并對其進行下一步研究。

2. 菌株鑒定結果

耐受低 pH 值、高濃度乳酸和琥珀酸的菌株 WJ-2 在 pH 3.0 的 YEPD 固體培養(yǎng)基上培養(yǎng) 2 d 后形成的菌落呈橢圓形或卵圓形，乳白色，表面隆起，邊緣整齊，表面光滑，無光澤，質粒粘稠。經(jīng)掃描電鏡觀察，10 000 倍放大倍數(shù)電鏡結果顯示菌體呈現(xiàn)卵圓形或者橢圓形，經(jīng)測量其長×寬平均為 3.00 μm×1.75 μm；參照酵母菌株 Saccharomyces cerevisiae YSG50 電鏡結果平均為長×寬為 4.5 μm× 3.5 μm 。耐受菌株 WJ-2 比 YSG-50 的尺寸小。18S rDNA 鑒定結果分析顯示，WJ-2 的 18S rDNA 共 1 450 bp，與 Saccharomyces cerevisiae 的相似度達到 99%以上，使用 MEGA 5 軟件，采用 Neighbor-Joining 方法，構建系統(tǒng)發(fā)育樹，分支左側的數(shù)值為聚類的置信度(%)，該發(fā)育樹的構建表明耐酸菌株與釀酒酵母 耐酸菌的亮發(fā)光桿菌落形態(tài) Figure 2 The morphology of WJ-2 on the acidic plate (Saccharomyces cerevisiae)的親緣關系zui近，分支置信度 63%，且由于菌株與菌株 Saccharomyces cerevisiae (JQ585703.1)具有zui高的相似性 85%，結合菌落形態(tài)觀察結果可認為所得菌株為一株釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。

3. 耐酸菌株WJ-2與對照菌株YSG-50生長曲線的比較

耐酸菌株 WJ-2 與對照菌株 YSG-50 在 pH 6.0 的培養(yǎng)條件下其生長曲線基本重合，表明兩株菌株在 pH 6.0 的條件下生長速率差別不大。pH 3.0 的培養(yǎng)條件對于耐酸菌株 WJ-2 的生長速率影響較小，但是對于 YSG-50 表現(xiàn)出明顯的抑制作用，表明耐酸菌株 WJ-2 的耐酸能力明顯高于 YSG-50。

4. 耐酸菌株zui適生長溫度，耐酸菌株WJ-2在培養(yǎng)溫度為30 °C 時菌體的生長速率zui快且生物量zui大。在其他溫度下菌株的生長溫度都有不同程度的下降。尤其在溫度達到40 °C時，菌株生長受到了強烈的抑制，可能由于維持亮發(fā)光桿菌株生長必需的關鍵酶活性在該溫度下受到了抑制，進而導致菌株生長緩慢。