菌種保藏的方法和原理

將菌種接種于所要求的培養(yǎng)基上﹐在zui適溫度中培養(yǎng)﹐至靜止期或產(chǎn)生成熟的孢子時﹐置入 5℃的冰箱(或冰庫)保存。在培養(yǎng)和保存的過程中﹐由于代謝產(chǎn)物的累積而改變了原菌的生活條件﹐結(jié)果菌落群體中的個體就不斷衰老和死亡﹐因此每5～15天或 1～4個月重新移植一次﹐具體間隔時間因種而異。凡能人工培養(yǎng)的微生物都可用此法保存。此法不需特殊設(shè)備﹐但煩瑣﹐費(fèi)時﹐而且經(jīng)常移植容易引起菌種退化。

礦油封藏法

將化學(xué)純的液體石蠟(礦油)經(jīng)高壓蒸氣滅菌﹐放在40℃恒溫箱中蒸發(fā)其中的水分﹐然後注入斜面培養(yǎng)物中﹐使液面高出斜面約 1厘米。將試管直立﹐放在15～20℃室溫中保存。由于在斜面培養(yǎng)物上覆蓋一層液體﹐既能隔絕空氣﹐又能防止培養(yǎng)基因水分蒸發(fā)而干燥﹐可以延長菌種保藏的時間。但注入的液體必須不與培養(yǎng)基混溶﹑對菌種無毒﹐不易被利用和揮發(fā)。此法適用于酵母菌﹑芽孢桿菌﹔不適用于固氮菌﹑乳酸桿菌﹑明串珠菌﹑法門氏菌和毛黴目中的大多數(shù)屬種。此法簡便易行﹐但必須注意防火和污染。

沙土管法

將沙或土過篩﹑烘干﹑裝管﹑滅菌﹑然後將菌種制成孢子懸液滴入其中混勻﹐放到盛氯化鈣的干燥器里吸除水分﹐干燥後保存或用火焰封管後保存。吸附在干燥沙土上的孢子因缺水而處于休眠狀態(tài)﹐可保存較長時期。此法適用于芽孢桿菌﹑梭狀芽孢桿菌﹑放線菌﹑鐮刀菌等。

麩皮法

將麩皮制成培養(yǎng)基﹐培養(yǎng)要保存的菌種﹐待生長良好後﹐置干燥器中保存。這是根據(jù)中國釀造酒﹑醋﹑醬時制麴的經(jīng)驗所采用的一種保藏方法﹐適用于谷物微生物區(qū)系中的種類。

L－干燥法

又稱液體干燥法或真空干燥法﹐用含3%谷氨酸鈉的0．1M磷酸緩沖溶液 (pH7.0)做分散媒﹐將待保藏的微生物制成高濃度的細(xì)胞懸液﹐滴入無菌安瓿瓶中﹐每管0.05毫升﹔將安瓿瓶固定在多歧管上﹐并以水浴保持安瓿瓶內(nèi)樣品溫度為10℃﹐在 13.3～1.3帕的真空度下干燥﹐火焰封管保存。此法不經(jīng)凍結(jié)﹐用真實泵迅速抽乾﹐可避免菌種的凍傷或死亡。廣泛應(yīng)用于病毒﹑噬菌體﹑細(xì)菌﹑酵母菌﹑藍(lán)藻﹑原生動物等。

梭氏法

將容有 1滴細(xì)胞懸液的小管﹐置于盛有氫氧化鉀或五氧化二磷吸水劑的大試管中﹐用真空泵抽至1.3帕?xí)r﹐將大試管密封保存。這是為減少細(xì)胞死亡率而采取的一種不經(jīng)凍結(jié)﹑緩慢脫水的干燥保藏法﹐適用于多種細(xì)菌﹑真菌。

冷凍真空干燥法

將細(xì)胞懸液每0.1～0.2毫升注入一無菌安瓿瓶﹐于-40℃預(yù)凍1小時﹐再于-20～30℃﹑真空度為13.3帕的條件下脫水。在脫水過程後期﹐安瓿瓶外溫度可逐漸升至25℃。脫水後的樣品含水量應(yīng)在 3%以下。zui後﹐將安瓿瓶保持真空度 1.3帕﹐用火焰溶封﹐置10℃保存。為防止細(xì)胞在凍結(jié)和脫水過程中損傷或死亡﹐要用保護(hù)劑制備細(xì)胞懸液。保護(hù)劑有脫脂牛奶﹑血清﹑10%蔗糖或葡萄糖溶液等﹐其作用是通過氧和離子鍵對水和細(xì)胞所產(chǎn)生的親合力來穩(wěn)定細(xì)胞成分的構(gòu)型。此法適用于病毒﹑衣原體﹑枝原體﹑細(xì)菌﹑放線菌﹑酵母菌﹑絲狀真菌等的長期保存﹐是當(dāng)前保藏菌種的一個重要方法。但是﹐鹽桿菌﹑發(fā)光桿菌﹑黏桿菌﹑阿舒囊黴﹑多囊黴﹑擔(dān)子菌中的大多數(shù)屬種不適用于此法保存。